Validación de métodos alternativos para análisis microbiológico de alimentos y aguas / Validation of alternative methods for the microbiological analysis of food products and water

El empleo de métodos microbiológicos alternativos para la detección de microorganismos es una herramienta importante para garantizar la inocuidad de alimentos y aguas. Numerosos y diversos métodos alternativos para microbiología se comercializan actualmente gracias a avances recientes, sobre todo en el campo de la biotecnología. Para que un nuevo método microbiológico sea aceptado, su fabricante debe demostrar su adecuación. En una primera revisión, se realizó el análisis de los principales parámetros determinados en la validación de los métodos microbiológicos cualitativos. El objetivo de esta segunda parte consiste en abordar los indicadores más importantes a considerar para los métodos microbiológicos cuantitativos

The use of alternative microbiological methods for the detection of microorganisms is an important tool to ensure the safety of food products and water. A large number of alternative microbiological methods are currently available on the market, thanks to recent advances mainly in the field of biotechnology. In order for a new microbiological method to be accepted, its manufacturer must prove its adequacy. In a first review, an analysis was made of the main parameters determined for the validation of qualitative microbiological methods. The purpose of this second part is to approach the most important indicators to be considered for quantitative microbiological methods

Identificación de Pseudomonas aeruginosa empleando el método del Número Más Probable / Identification of Pseudomonas aeruginosa using the Most Probable Number method

La detección de Pseudomonas aeruginosa está  cobrando una importancia cada vez mayor, debido a que su presencia en el agua, tanto de uso industrial, hospitalario, público y doméstico, puede ocasionar brotes de importantes enfermedades para el hombre. Objetivo: Identificar P. aeruginosa en muestras de aguas tratadas y no tratadas, en forma simultánea con la identificación de coliformes totales y fecales. Métodos: Utilizando el caldo asparagina para la identificación presuntiva de P. aeruginosa y agar cetrimida, como prueba confirmativa, además de las pruebas de oxidasa y catalasa, en este trabajo se muestran resultados obtenidos en la identificación de P. aeruginosa en 69 muestras de agua de cisterna, pozo, presa y residual doméstico. Resultados: Del total de muestras analizadas, resultaron positivas a P. aeruginosa el 59.42%. Hubo presencia compartida de P. aeruginosa y coliformes totales y fecales en un 33.3%. Conclusiones: El empleo de la técnica del Número Más Probable para la identificación de Pseudomonas aeruginosa utilizando los medios de cultivo caldo asparagina y agar cetrimida, constituye un método eficaz para la detección de estemicroorganismo en muestras de aguas de diferentes fuentes.

The detection of Pseudomonas aeruginosa in water samples is crucial because the contamination of water sources such as industrial, hospital, public and domestic is frequently the cause of important human outbreaks. In this work we evaluated the used of the asparagine broth and cetrimide agar produced in BioCen, Havana, Cuba, for the presumptive and confirmative identification of P. aeruginosa, respectively. Objective: To identify P. aeruginosa in samples of treated and not treated waters, in simultaneous with the identification of total and fecal coliforms. Methods: Sixty nine samples from cistern water, well, prey and domestic waste were taken. The presumptive identification was performed by Most Probable Number Technique using asparagine broth, confirmative test was carried out using cetrimide agar followed by oxidase and catalasa tests. Results: The presence of P. aeruginosa was identified in the 59.42% of the samples analyzed. It was also demonstrated the common presence of Pseudomonas aeruginosa and total and fecal coliforms in 33.33% of the samples. Conclusions: The employment the Most probable Number technique for the identification of Pseudomonas aeruginosa using the culture media asparagine broth and cetrimide agar, it constitutes an effective method for the detection of this microorganism in samples of waters of different sources.

Validación de métodos alternativos para análisis microbiológico de alimentos y aguas. cualitativos / Validation of alternative methods for microbiological analysis of foods and water. Qualitative methods

Internacionalmente han aumentado las exigencias para la adopción de nuevos métodos microbiológicos para el análisis de aguas y alimentos. Estos son adoptados cuando ofrecen rapidez, menor laboriosidad, son más sencillos, entre otras ventajas. Para lograr este objetivo, es necesario demostrar su fiabilidad y la equivalencia en relación con los métodos tradicionales existentes. En Cuba esta temática es relativamente incipiente, por lo tanto, resulta oportuno realizar una revisión bibliográfica sobre esta materia. El objetivo de esta primera revisión consiste en abordar los parámetros más significativos relacionados con la validación de métodos microbiológicos cualitativos alternativos.

Internationally the demands for the adoption of new microbiological methods for the analysis of waters and foods have increased. These are adopted when they are high-speed, less laborious, more easy, among other advantages. To achieve this objective, it is necessary to demonstrate their reliability and the equivalence according to the existent traditional methods. In Cuba this topic is relatively incipient, therefore it is appropriate to carry out a review on this matter. The objective of this first revision consists on approaching the more significant parameters related with the validation of alternative qualitative microbiological methods.

Evaluación del nuevo medio CromoCen ECCS para la detección e identificación de bacterias enteropatógenas / Evaluation of the new CromoCen ECCS medium for detection and identification of enteropathogenic bacteria

Introducción: últimamente se ha desarrollado una variedad de medios de cultivo cromogénicos que constituyen herramientas útiles para el diagnóstico microbiológico. Objetivo: evaluar la eficacia de un nuevo medio cromogénico/fluorogénico, CromoCen ECCS, para la detección e identificación presuntiva de bacterias gramnegativas en el análisis de muestras fecales. Métodos: en el estudio de inclusividad se utilizaron 10 cultivos bacterianos de colecciones de referencia y 33 de origen clínico. Para el análisis de funcionalidad se emplearon 68 muestras fecales de un hospital pediátrico. Como referencia se emplearon los medios de cultivo agar SS y agar MacConkey. La identificación se realizó mediante pruebas bioquímicas y serológicas. Resultados: se evidenció que 92,8 de las cepas de Salmonella enterica, incluidos los serotipos Typhi y Paratyphi, desarrollaron colonias con características típicas en el medio de cultivo cromogénico. La sensibilidad, especificidad y exactitud diagnósticas estuvieron entre 97 y 100 para todos los grupos de interés, superando a los valores de los medios empleados en el diagnóstico de manera tradicional. En 14 muestras para coprocultivo se detectó el crecimiento de colonias de Salmonella enterica; de ellas 13 se confirmaron como positivas en la siembra directa en CromoCen ECCS, en un período de solo 24 h. No se observaron diferencias estadísticamente significativas para la proporción de muestras positivas detectadas en los medios CromoCen ECCS y agar SS. La única muestra positiva para Escherichia coli O157 a partir de las muestras fecales originales se detectó en el medio CromoCen ECCS y la infección causada por esta bacteria fue asociada con la de Salmonella. Conclusión: este medio resultó útil para la identificación presuntiva de bacterias gramnegativas, como Escherichia coli O157:H7, Salmonella y Shigella, porque se lograron obtener colonias con características culturales fácilmente diferenciadas.

Background: In last few years, a wide range of chromogenic cultural media has been developed to provide useful tools for microbiological diagnostic. Objective: To evaluate the efficacy of a new chromogenic/fluorogenic medium _ known as CromoCen ECCS_ for the detection and presumptive identification of Gram-negative bacteria by examining stool specimens. Methods: Ten bacterial cultures from the reference collections and thirty three other isolated clinical strains were used in the inclusivity study. For the performance analysis, 68 stool specimens from one pediatric hospital were used. As a reference, SS agar and MacConkey agar were used as cultural media, with further identification by biochemical and serological tests. Results: It was evidenced that 92.8 percent of Salmonella enterica strains, including Typhi and Paratyphi serotypes, developed typical colonies in the chromogenic cultural medium. Diagnostic sensitivity, specificity and efficiency ranged from 97 to 100 for all target groups, and were better than the values of traditional cultural media. Growth of Salmonella enterica colonies was detected in 14 samples for coproculture and 13 of them were confirmed to be positive in direct culture in CromoCen ECCS for 24 hours. There were not statistically significant differences between the ratio of Salmonella-positive samples detected on CromoCen ECCS and on SS agar. The only sample positive to Escherichia coli O157 was isolated on the CromoCen ECCS. The infection caused by this bacterium was associated with that of Salmonella. Conclusion: This cultural medium was useful for presumptive identification of Gram-negative bacteria such as Escherichia coli O157:H7, Salmonella and Shigella, because the developed colonies had easily distinguished cultural characteristics.